【爱卿投稿】新冠随笔之为什么我的PCR结果无效

【爱卿投稿】新冠随笔之为什么我的PCR结果无效



这是来自作者【膜拜票的车间主任。。。的朋友】的新冠随笔第二弹~
前文回顾:【爱卿投稿】新冠疫苗随笔~FDA批准的疫苗是什么?我何时可以接种疫苗?

 

心情忐忑了好几天,像刮奖一样打开核酸检测结果,结果既不是阴性也不是阳性,而是无效打开的瞬间我都觉得整个人都无效了……

 



 

大家好,这次和大家聊聊关于新冠核酸检测的话题以及试着回答大家最关心的问题,为什么我的核酸结果是Invalid(无效)?

 

(来自票帝“爱卿投稿”)

 

新冠检测之pRT-PCR

 

首先我们研究一下新冠病毒是如何被检测到的。首先新冠病毒(SARS-Cov-2)是一种正链RNA病毒。目前对RNA直接扩增并检测的手段并不多,所以提取出病毒RNA后,首先要把病毒RNA用逆转录酶(Reverse transcriptase, RT) 转化成DNA。接种再用qRT-PCR的手段进行扩增。

 

我们看图一:

图一 qRT-PCR反应。
笔者用BioRender制作。

其中1-4是一个周期,也就是Cycle。当目标序列,也就是病毒DNA被扩增后,会产生一个荧光反应。如果我们用周期做横轴,荧光强度做纵轴,那么荧光强度是随着周期的增多而增强。这个增长的趋势是指数上升的,而且会饱和。通常的做法是在纵轴的中间画一条线,也就是荧光强度刚好在指数上升的过程中但尚未饱和。这条线对应的横轴,就是Ct值。Ct值越小,就说明病毒拷贝数量越多,需要扩增的周期越短。关于Ct值应该多小才能宣布阳性,学术界没有定论。通常这个数值是37-40左右。当Ct值超过40,通常被认定为阴性。

 



为什么会出现Invalid(无效)结果?

 

我们来看下面的表格。假设某公司推出了一款新冠病毒检测试剂盒,那么以下是使用指南:

 

其中的GAPDH是人的甘油醛-3-磷酸脱氢酶,在所有人体组织中广泛表达。为了确保样本的准确性,通常新冠病毒检测的实验中都会加入一个人基因做参照。常用的参照基因除了GAPDH,还有B2M, ACTB等。为什么必须加入一个人的基因做参照?这是因为新冠是一种病毒,病毒只能在人的细胞内复制。加入人的基因做参照,能确保病毒RNA是由人体细胞内提取出来的,而不是大风刮来的污染。

 

当出现表格中的第二种或第三种情况的时候,说明人基因没有检测到。为什么会导致这种情况?可能是取样的手段不规范,没有采集到人的细胞(捅得不够深,捅得不规范);也有可能是假阳性,甚至是试剂盒有问题,甚至采样污染/丢失等等情况。

 

总结

遇到Invalid的结果,首先需要淡定,不要慌,你不一定是阳性患者……但你需要马上联系检测点再做一次或者换一家机构做检测,以保证有充足的时间获得新的报告并上传拿到绿码。(一般检测点为帮忙加急)

 

目前从票帝的投稿来看,遇到Invalid结果的概率非常低,大概不到千分之一,所以不用过度恐慌。

希望大家出行顺利!



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